产品目录

本试剂盒是通过对ATP进行定量测定来检测培养物中活细胞数目的一种均质检测方法。ATP是活细胞新陈代谢的一个指标。细胞活力快速检测试剂盒为多孔板而设计，是进行自动化高通量筛选(HTS)、细胞增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入含有血清的培养细胞中，无需洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。在384孔板上，加入试剂并混合后，10分钟内，该系统可检测到的每个孔内的细胞数最低为15个。

均质检测的"加样-混合-检测"的操作方案使得细胞裂解和产生的发光信号与存在ATP量成正比，而ATP量直接与培养物中的细胞数量成正比。细胞活力快速检测试剂盒产生一种"辉光型"的发光信号，半衰期一般大于5小时，因细胞类型和培养基而异。由于信号半衰期长，不需要使用试剂自动进样器，就可灵活地进行连续的或批量的多孔板处理。独特的均质检测方案避免了那些需要多个步骤的ATP检测方法可能会引入的误差。

1. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。
   
2. 用酶标仪检测前请确保孔内没有气泡，否则会干扰测定。
   
3. 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 细胞活性检测的操作步骤
   
   1. 在一块壁不透明的多孔板上准备好带培养基的哺乳动物细胞，96孔板100μL/孔，384孔板25μL/孔。多孔板应与将使用的萤光发光计匹配。
      
   2. 准备只含培养基不含细胞的对照孔，以得到背景发光值。
      
   3. 在实验孔中加入待测化合物，按合适的条件进行孵育。
      
   4. 将平板及其内容物平衡到室温，大约需要30分钟。
      
   5. 向每孔中加入与细胞培养基体积相等的细胞活力快速检测液(如，向96孔板内含100μL/孔的培养基中加100μL试剂)。
      
   6. 在一个定轨振荡器上混合内容物2分钟，诱导细胞裂解。
      
   7. 将平板室温孵育10分钟，使萤光信号值稳定。
      注意：温度梯度，细胞分布不均匀和孔的边际效应可能导致不稳定的萤光信号值。
      
   8. 记录发光信号。(仪器设置取决于仪器制造商。每孔整合读数时间设为0.25～1秒可作为设置参考。)
2. ATP标准曲线操作步骤(非必须)
   规范的操作是在样品检测的同一块平板上进行ATP标准曲线实验。
   
   1. 在培养基中配制1μM ATP (100μL的1μM ATP含10-10mol ATP)。
      
   2. 在培养基中对ATP进行10倍系列稀释(1μM到10nM;100μL体积将含有10-10到10-12mol的ATP)。
      
   3. 在多孔板的100μL培养基内制备不同浓度的标准ATP溶液。
      注意：由于血清中存在的ATP酶降解ATP水平，ATP标准品配好后应立即加入试剂。
      
   4. 在每孔中加入与ATP标准液等体积的细胞活力快速检测液(1:1体积比)。
      
   5. 在振荡器上混合内容物2分钟。
      
   6. 室温孵育10分钟，稳定萤光信号值。
      
   7. 记录发光值。